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微生物測量在食品、臨床醫(yī)學(xué)和環(huán)境檢測等諸多領(lǐng)域具有非常重要的意義，對微生物活細胞的快速檢測更是一個令人關(guān)注的課題。國內(nèi)外的微生物學(xué)家、物理學(xué)家、電子信息和化學(xué)科學(xué)家充分利用微生物的熱學(xué)、光學(xué)、電化學(xué)和生物化學(xué)性質(zhì)，提出了一系列新型的微生物快速檢測方法。測量生活飲品的細菌含量，國際上公認的有標準平板培育法和顯微鏡直接觀察法。但這兩種方法都存在一定的缺點，除了需要熟練的操作技能外，標準平板培育法的培育時間長達數(shù)日，而顯微鏡觀察法則要一直觀測到細菌死亡。因此，對于要求迅速和多體的檢測對象，顯然不適宜采用上述兩種方法。 1 已有的檢測儀器 近兩年來，國外一些科技公司相繼研制開發(fā)了食品和奶乳制品微生物快速檢測的相關(guān)檢測儀器，并在我國設(shè)立了代理商。其具有代表性的有美國Hygiena生產(chǎn)的Pi一102食品細菌快速測定儀，該食品細菌含量快速測定儀主要利用ATP生物發(fā)光法，配合高靈敏光電倍增管和專用試劑，可在10分鐘內(nèi)對食品樣品(經(jīng)前處理)中所含微生物總數(shù)做出快速估算，將該檢測結(jié)果數(shù)據(jù)與國家相應(yīng)標準對應(yīng)，可初步判斷食品樣品中的微生物情況，如是否超標。ATP是三磷酸腺苷的簡稱，是細胞內(nèi)供能分子。Pi一102食品細菌快速測定儀通過檢測樣品中的ATP與熒光素酶的發(fā)光反應(yīng)來得出光單位讀數(shù)，經(jīng)換算即可估算出ATP的總數(shù)水平，然后進一步間接判斷樣品中的微生物總數(shù)，以為食品衛(wèi)生監(jiān)督現(xiàn)場檢測提供參考。該檢測儀在中國的銷售價為7．9萬元人民幣。但因ATP生物發(fā)光反應(yīng)受各類因素(溫度、酸堿、稀釋濃度等)影響，結(jié)果與常規(guī)培養(yǎng)所得的CFU (colonvformine unit，菌落形成單位)存在一定偏差，所以該檢測建議用戶設(shè)定臨界值做參考。 其次，BactoCount IBC—M是美國BENTLEY公司最新推出的一款半自動牛奶細菌計數(shù)儀。該儀器是針對中小型實驗室設(shè)計的。快速的檢測結(jié)果是其成為牛奶加工廠或牛奶制品實驗室的工具，從而填補了對奶源的微生物快速檢測的空白。該儀器的檢測步驟和原理首先是培養(yǎng)(樣品準備)，即在奶樣中加入由凈化緩沖液、水解蛋白酶和熒光標記液組成的培養(yǎng)試劑，以溶解奶樣中的體細胞、穩(wěn)定脂肪球和蛋白、滲透細菌并沾染DNA。在培養(yǎng)過程中，熒光標記液可以快速滲入到所有雙層核酸的細菌中。同時超聲波降解器可對干擾粒子進行化學(xué)降解、瓦解剩余的細菌菌落并減少背景熒光。該檢測儀在中國的銷售價為72萬人民幣。 另外，就是丹麥福斯公司(Foss)的BactoScan FC型系列牛奶細菌總數(shù)快速分析儀。利用該檢測系統(tǒng)，用戶可在一分鐘內(nèi)獲得原料奶中的細菌總數(shù)量，可為牧場和乳品加工企業(yè)提供快速、可靠的數(shù)據(jù)。依靠這些快速準確的信息，牧場就可及時改進其衛(wèi)生狀況，提高所售產(chǎn)品的質(zhì)量。特別是乳品加工廠，可用其快速的優(yōu)勢實時對現(xiàn)場進廠的原料進行有效檢測，以將細菌指標不合格的原料奶擋在加工廠之外，從而避免給加工企業(yè)造成損失。而可靠的數(shù)據(jù)又可為牧場和乳品廠按質(zhì)計價提供公平全面的分析手段。 目前，F(xiàn)low Cytometry(流氏細胞計數(shù)原理／對流動中的細胞、細菌或顆粒計數(shù)和特性認定)技術(shù)已被生物化學(xué)和醫(yī)學(xué)科技界廣泛應(yīng)用。其原理是將被測定的細胞／顆粒染色并置于懸浮液體之中，然后強迫細胞／顆粒逐一通過一個非常窄小的縫隙／管道。同時向其發(fā)出特殊光束，使得每一個被染色后的細胞／顆粒在通過測定點時也發(fā)出回應(yīng)光束脈沖信號，然后采用電子技術(shù)再將其脈沖信號記錄下來。該檢測儀在中國的銷售價為140萬元人民幣。 2 信息采集及放大電路設(shè)計 近年來，國內(nèi)的微生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、物理和電子信息等學(xué)科的相關(guān)專家在食品的農(nóng)藥殘余、有害化學(xué)成分和有害微生物的檢測等方面也進行了廣泛而深入的研究，發(fā)表了大量的相關(guān)學(xué)術(shù)論文。其具有代表性的微生物檢測生物電化學(xué)方法是蔡豪斌2000年發(fā)表在《華夏醫(yī)學(xué)》上的文章“微生物活細胞檢測生物傳感器的研究”和盧智遠等2005年發(fā)表在《傳感技術(shù)學(xué)報》上的文章“一種微生物檢測的生物電化學(xué)方法研究”，但是在國內(nèi)尚沒有見到該方面微生物檢測實際應(yīng)用的報導(dǎo)。 在前期研究的基礎(chǔ)上，本文對于有關(guān)文獻中的試驗數(shù)據(jù)進行了信息采樣與數(shù)據(jù)處理，同時進行了微生物快速檢測儀的設(shè)計制作。表1所列是盧智遠等人在其文獻中給出的25℃時的鮮牛奶細菌含量與傳感器的試驗數(shù)據(jù)。 由表1可見，傳感器輸出的電流和電壓十分微弱，這樣，在信息的模數(shù)轉(zhuǎn)化和信號處理過程中可能會產(chǎn)生誤差，故應(yīng)設(shè)計如圖1所示的具有微電流放大作用的放大電路。該放大電路采用具有高增益、高共模抑制比、失調(diào)小和漂移較低的ICL7650作為運算放大器，并考慮了相位補償、電源波動及干擾濾除等因素。該放大器具有高輸入阻抗和低輸出阻抗，閉環(huán)放大倍數(shù)為50。生物電池盒輸出的信號經(jīng)微電流放大器可以進行有效的放大。 該檢測儀只要通過點擊圖中的Start按鍵，就可以開始進行電流值的數(shù)據(jù)采集，然后經(jīng)過程序中的函數(shù)運算，直接得出牛奶中對應(yīng)的細菌數(shù)目。當點擊按鍵Stop時，曲線靜止，對應(yīng)的電流值及細菌數(shù)目數(shù)值顯示即為點擊時的瞬時值。圖3所示是該檢測儀的實物圖。 3 結(jié)束語 本文介紹的生物電池盒與該軟件系統(tǒng)構(gòu)成的微生物檢測儀，可用Matlab對多次重復(fù)測量所得的各條曲線進行擬和處理，從而得出傳感器輸出電壓與細菌含量的最終曲線，并根據(jù)該曲線數(shù)據(jù)編寫程序，即可得到傳感器輸出電壓與乳制品細菌含量的對應(yīng)數(shù)據(jù)。然后再用該測試儀對無菌袋裝鮮牛奶的細菌含量進行測定，便可驗證該電化學(xué)生物傳感器的有效性。該檢測儀的數(shù)據(jù)檢測誤差為百分之五，故其相關(guān)的技術(shù)還需要改進和提高。但該檢測儀已極大的提高了微生物檢測的速度和效率。而且檢測輸出的數(shù)據(jù)直觀明了，從而改變了細菌人工計數(shù)或用顯微鏡觀察統(tǒng)計計數(shù)的傳統(tǒng)方法。 |
